單克隆抗體的制備過(guò)程與原理

　　單克隆抗體制備它常用于小量培養(yǎng)到大規(guī)模培養(yǎng)的過(guò)渡階段,通過(guò)轉(zhuǎn)瓶不斷旋轉(zhuǎn)使細(xì)胞呈懸浮狀態(tài),在培養(yǎng)瓶中均勻分布,充分利用養(yǎng)分,并擴(kuò)大氣液接觸面,便于氧氣的傳遞。而工業(yè)化、商業(yè)化大規(guī)模懸浮培養(yǎng)多采用生物反應(yīng)器,其深層培養(yǎng)可分為分批式、流加式、連續(xù)式和灌注式等。培養(yǎng)法是應(yīng)用一種對(duì)細(xì)胞無(wú)害的顆粒作為細(xì)胞生長(zhǎng)的介質(zhì),細(xì)胞附著于其表面生長(zhǎng),在持續(xù)攪動(dòng)作用下微載體懸浮于培養(yǎng)液中。
 

　　單克隆抗體制備過(guò)程與原理：
 

　　1、免疫動(dòng)物
 

　　免疫動(dòng)物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細(xì)胞的過(guò)程。一般選用6-8周齡雌性Balb/c小鼠，按照預(yù)先制定的免疫方案進(jìn)行免疫注射。抗原通過(guò)血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免疫器官，刺激相應(yīng)B淋巴細(xì)胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細(xì)胞。
 

　　2、細(xì)胞融合
 

　　采用眼球摘除放血法處死小鼠，無(wú)菌操作取出脾臟，在平皿內(nèi)擠壓研磨，制備脾細(xì)胞懸液。將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞按一定比例混合，并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各種淋巴細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合，形成雜交瘤細(xì)胞。
 

　　3、選擇性培養(yǎng)
 

　　選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細(xì)胞，一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基。在HAT培養(yǎng)基中，未融合的骨髓瘤細(xì)胞因缺乏鳥(niǎo)嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，不能利用補(bǔ)救途徑合成DNA而死亡。未融合的淋巴細(xì)胞雖具有鳥(niǎo)嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，但其本身不能在體外長(zhǎng)期存活也逐漸死亡。只有融合的雜交瘤細(xì)胞由于從脾細(xì)胞獲得了鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，并具有骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖的特性，因此能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。