細胞轉染那些事兒

一、轉染的途徑大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類：

1.物理介導：電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例。

2.化學介導：方法很多，如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術。

3.生物介導：方法有較為原始的原生質體轉染，和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。

理想細胞轉染方法，應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。病毒介導的轉染技術，是目前轉染效率zui高的方法，同時具有細胞毒性很低的優勢。但是，病毒轉染方法的準備程序復雜，常常對細胞類型有很強的選擇性，在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉染方法，則各有其特點。

需要指出的一點，無論采用哪種轉染技術，要獲得*的轉染結果，可能都需要對轉染條件進行優化。影響轉染效率的因素很多，從細胞類型、細胞培養條件和細胞生長狀態，到轉染方法的操作細節，都需要考慮。

二、常規轉染技術：

1.瞬時轉染（transient transfection）：外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數，產生高水平表達，但通常只持續幾天，多用于啟動子和其他調控元件的分析。一般來說，超螺旋質粒DNA轉染效率較高，在轉染后24~72h小時內（依賴于各種不同的構建）分析結果，常常用到一些報告系統和熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫助檢測。

2.穩定轉染（Stable transfected）：外源DNA既可以整合到宿主細胞中，也可能作為一種游離體（episome）存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小，大約1/104轉染細胞能整合，通常需要通過一些選擇性標記。如來氨丙基轉移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素磷酸轉移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反復篩選，得到穩定轉染的同源細胞系。

瞬時轉染和穩定轉染的比較

三、轉染方式

細胞由帶負電荷的磷脂雙分子層構成，這對大分子物質來說是個不可透過的屏障，比如DNA和RNA的磷酸骨架，其也帶負電荷。為了使核酸穿過細胞膜，研究人員開發了多種技術，大致分為三類：化學方法---利用載體分子包被核酸使其呈現中性電荷或正電荷。生物方法---利用基因工程病毒轉染非病毒基因到細胞中。物理方法---在細胞膜表面產生一個瞬時的孔從而導入DNA。然而，沒有一種方法適用于所有的細胞和實驗，理想的方法應根據您的細胞類型和實驗需要進行選擇，理想的方法應具有高轉染效率，低細胞毒性和對正常生理學的影響最小，并且易于使用和可重復性等特點。