技術(shù)服務(wù) 兔子單克隆抗體制備

更新時間：2020-04-29

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限于技術(shù)保護(hù)的原因，目前，兔單克隆雜交瘤細(xì)胞制備技術(shù)被一家公司壟斷，所以我們無法通過像類似制備小鼠單克隆抗體那樣，制備兔源雜交瘤細(xì)胞獲得兔源單克隆抗體。為此，公司在一大批免疫學(xué)與基因工程學(xué)專家的幫助下，先后建立了兩套兔源單克隆抗體制備方案。這兩種方案均不依賴于兔源骨髓瘤細(xì)胞，但是其抗體的種源特性毫無疑問是兔源，在保留兔源單克隆抗體優(yōu)勢的同時，大大壓縮試驗(yàn)周期，提高試驗(yàn)成功率。

方案一噬菌體展示技術(shù)

M13單鏈絲狀噬菌體展示系統(tǒng)是目前應(yīng)用廣泛的文庫展示系統(tǒng)，通過將蛋白、抗體或多肽與噬菌體pIII蛋白融合表達(dá)，使之參與噬菌體組裝，并展示在噬菌體表面，形成噬菌體展示文庫。使用噬菌體展示文庫，針對特定靶分子進(jìn)行3-5 輪親和篩選，可以富集能特異性結(jié)合靶分子的噬菌體，得到相應(yīng)的DNA序列信息。

艾柏森（北京）生物科技有限公司目前開發(fā)的噬菌體展示技術(shù)服務(wù)平臺涵蓋了免疫抗體庫、天然抗體庫等常用的文庫類型，可根據(jù)客戶的特殊需求定制個性化文庫，并提供靈活高效的篩選服務(wù)。在此技術(shù)儲備的基礎(chǔ)上，我們提供的兔源單克隆抗體噬菌體展示方案，可高效靈活的根據(jù)客戶需要大規(guī)模探測高親和力抗體，同時結(jié)合公司*的兔源Fc表達(dá)質(zhì)粒，與高效真核表達(dá)系統(tǒng)，使得我們的抗體擁有*的表達(dá)效率。

方案二重組抗體制備技術(shù)

艾柏森（北京）生物科技開發(fā)出一種革命性的單克隆抗體生產(chǎn)技術(shù)，使單克隆抗體的生產(chǎn)不殘害動物，不依賴雜交瘤。該技術(shù)通過分離培養(yǎng)B細(xì)胞，并利用ELISA、Western Blot、IHC（Immunohistochemistry）等方法篩選出抗原特異性B細(xì)胞。再通過分子克隆的手段重組表達(dá)完整的抗體分子。該技術(shù)可用于開發(fā)高品質(zhì)的兔子和小鼠等不同物種的單克隆抗體。

其主要依托技術(shù)有：

高效的B細(xì)胞體外培養(yǎng)體系

高通量B細(xì)胞篩選技術(shù)

穩(wěn)定的VH和VL抗體分子表達(dá)體系

高通量的抗體分子測序平臺

服務(wù)項(xiàng)目

服務(wù)項(xiàng)目 (Service Items)		周期（周） Time(weeks)	方案一：噬菌體展示技術(shù) （Phage Display）					方案二：異源表達(dá)重組技術(shù) (Heterogeneous Recombination)
			多肽 Peptide	小分子 Molecular	磷酸基/甲基/乙基化多肽 Phosphate/Methyl/ acetyl-specific			目前只有針對部分腫瘤相關(guān)通路熱點(diǎn)分子的抗原，詳情請與公司技術(shù)人員溝通
多肽設(shè)計(jì)與合成 Peptide design & synthesis	多肽設(shè)計(jì) Peptide design	~2	可選，免費(fèi)
	多肽合成 Peptide synthesis		√			√
	小分子或多肽偶聯(lián) conjugation		√	√		√
免疫階段 Immunization	免疫2只兔子 Immunized 2 rabbits	~8	√	√		√	√
	ELISA檢測 Elisa detection		√	√		√	√
cDNA制備 cDNA preparation	逆轉(zhuǎn)錄制備cDNA文庫 prepare cDNA library by RT-PCR	~1	√	√		√	√
	cDNA 文庫質(zhì)檢 cDNA library QC check		√	√		√	√
構(gòu)建Fab抗體庫 Fab library construction	VH與VL基因獲得 obtained VH and VL genes	10~15	√	√		√	√
	構(gòu)建初級抗體庫 primary antibody library construction		√	√		√	√
	構(gòu)建Fab抗體庫 Fab library construction		√	√		√	√
噬菌體篩選 phage screening	噬菌體顆粒包裝 phage particles package	10~15	√	√		√
	磁珠親和篩選 magnetic beads affinity screening		√	√		√
	陽性克隆回收基因測序 Recover positive clones and DNA sequencing		√	√		√
抗體表達(dá) Antibody expression	特異性雙鏈基因合成與Fc基因橋接 synthetic of target phage gene and Fc gene	~5	√	√		√	√
	構(gòu)建真核表達(dá)載體 Eukaryotic system expression plasmids construction		√	√		√	√
	真核表達(dá) Eukaryotic system expression		√	√		√
	穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系構(gòu)建 Stably transfected cell line construction						√
純化與檢測 Purification and detection	標(biāo)簽純化 Tag affinity purification	~1	√	√		√	√
	特異性親和純化 Antigen specific affinity purification		√	√		√	√
總周期（月） Total lead time(months)			7~9				3~5

注：

價格面議；

請慎重考慮周期事宜，以上時間僅為理想條件下短周期；

為了縮短試驗(yàn)周期建議考慮自行提供抗原直接免疫做起；

免疫環(huán)節(jié)設(shè)立驗(yàn)收節(jié)點(diǎn)，效價合格，取脾臟，效價不合格，終止實(shí)驗(yàn)；

抗體庫構(gòu)建步驟啟動之前，至少支付此步驟的50%全款；完成項(xiàng)目，支付尾款。

服務(wù)組合:

客戶：提供抗原蛋白信息
制備流程：
1）抗原制備\質(zhì)粒表達(dá)蛋白純化\多肽設(shè)計(jì)合成及交聯(lián)；
2）免疫：*免疫兔子2只，失敗后又加免3只；
3）ELISA/Western-blot試驗(yàn)監(jiān)控兔子血清中的抗體效價和特異性，根據(jù)ELISA和WB檢測，篩選兔子；
4）cDNA文庫制備與噬菌體載體構(gòu)建；
5）磁珠鏈霉素親和篩選；
6）陽性克隆測序與基因合成橋接；
7）真核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建；
8）穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞構(gòu)建； 9）試表達(dá)鑒定與結(jié)果交付；
交付產(chǎn)品（每種抗原，所有兔子總共的）
1）1株針對免疫原特異性的單克隆雜交瘤細(xì)胞株
2）1ml（濃度約0.1~1mg/ml）純化的抗體，Elisa效價應(yīng)至少1:200以上；
制備時間：3~6個月
成功案例：
Publication: Plos One	IF：3.05
Title：TSC1/2 signaling complex is essential for peripheral naïve CD8+ T cell survival and homeostasis in mice.	Name：anti- Tuberin antibody
Species: Mouse	Type：Rabbit Recombination Monoclonal antibody

兔子單克隆抗體制備.1.jpg

兔子單克隆抗體制備.2.png

Immunohistochemical analysis ofparaffin-embedded mouse placenta tissue using anti-Tuberin antibody. Counterstained with hematoxylin.

Recommended constration: 1:200

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